MLPA: uma técnica versátil para o diagnóstico de doenças genéticas

Você provavelmente já leu sobre a técnica de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification ou MLPA, uma técnica extremamente eficiente quando o objetivo é identificar e/ou quantificar sequências específicas de DNA. Essa técnica é particularmente útil para avaliar variações no número de cópias de determinadas regiões genômicas, como deleções ou duplicações.

De maneira bastante resumida, o princípio metodológico do MLPA inclui:

• Probes (sondas): Sondas específicas são projetadas para se ligar a sequências de interesse no DNA. Cada sonda é composta por duas partes, uma para cada extremidade da sequência alvo.
• Ligação: As sondas são misturadas com a amostra de DNA. Se as sequências alvo estiverem presentes no DNA da amostra, as sondas se ligarão às suas respectivas sequências.
• Ligação das sondas: Após a ligação, as duas partes de cada sonda se unem, criando uma sonda completa e funcional. A ligação é feita por enzimas específicas, como a ligase.
• Amplificação: As sondas ligadas são então amplificadas usando técnicas de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). O DNA amplificado contém cópias da sequência alvo, e o número de cópias amplificadas é proporcional à quantidade original de sequência presente na amostra.
• Análise: A análise final é realizada por eletroforese capilar ou outras técnicas que permitem a separação e identificação das sequências amplificadas. Com base na quantidade de amplificação, é possível determinar se há variações no número de cópias das sequências alvo.

A MLPA é frequentemente usada em diagnósticos genéticos, pesquisas genômicas e estudos de doenças genéticas para identificar anomalias cromossômicas e alterações no número de cópias de genes específicos. Essa técnica é flexível e pode ser aplicada a uma variedade de amostras, como DNA extraído de sangue, saliva ou tecidos.