O SALSA MLPA Probemix P140 HBA é um ensaio semiquantitativo de diagnóstico in vitro (IVD) 1 ou apenas para uso em pesquisa (RUO) 2 para a detecção de deleções ou duplicações no agrupamento de genes da Alfa-globina ( HBA ) e sua região reguladora em DNA genômico isolado de amostras de sangue total periférico humano. O P140 HBA pode ser usado para confirmar aberrações parentais em amostras pré-natais, em DNA isolado de líquido amniótico (não) cultivado obtido na semana 16 de gravidez ou mais tarde e livre de contaminação sanguínea, ou vilosidades coriônicas (não) cultivadas livres de contaminação materna. Além disso, esta mistura de sondas pode ser utilizada para detectar a presença da mutação Hb Constant Spring no gene HBA2 . O P140 HBA destina-se a confirmar uma causa potencial e o diagnóstico clínico de alfa-talassemia, para testes genéticos moleculares de familiares em risco e para rastreio de portadores em populações de risco.O SALSA MLPA Probemix P140-C1 HBA contém 45 sondas MLPA com produtos de amplificação entre 130 e 481 nucleotídeos (nt). Isto inclui 34 sondas para o agrupamento de genes da alfa-globina e suas regiões flanqueadoras, incluindo uma sonda específica para a mutação Hb Constant Spring em HBA2 que irá gerar um sinal claro (>10% da altura média do pico de todas as sondas de referência na amostra ) quando a mutação está presente. Além disso, estão incluídas 11 sondas de referência que detectam localizações cromossômicas autossômicas.Estão presentes oito sondas que detectam sequências nos genes HBA . Isto inclui duas sondas para o intrão 2 de HBA2 , duas sondas para o intrão 2 de HBA1 e três sondas (172, 214 e 220 nt) que detectam sequências presentes tanto em HBA1 como em HBA2 . Ao lado desses HBAPara sondas específicas, o probemix contém 18 sondas para sequências em outras partes do agrupamento de genes da alfa-globina e duas sondas para o elemento regulador HS-40. Finalmente, uma sonda detecta uma sequência telomérica do elemento regulador HS-40 e cinco sondas detectam uma sequência centromérica do agrupamento de genes da alfa-globina. Estas sondas de flanqueamento são incluídas para delinear a extensão de deleções/duplicações maiores no agrupamento de genes da alfa-globina.

Este probemix contém cinco pares de sondas visando locais com uma diferença de sequência muito pequena entre HBA1 e HBA2 : uma sonda detectando a sequência HBA1 e a outra sonda detectando a sequência HBA2 . Devido à proximidade destes genes, é possível que em alguns indivíduos saudáveis ​​a sequência HBA2 em um ou mais destes cinco locais seja alterada pela conversão do gene na sequência HBA1 (ou vice-versa ), sem quaisquer consequências clínicas. Os pares de sondas que podem ser afetados desta forma são as sondas de íntron 2 de 160 e 165 nt, as sondas de íntron 2 de 244 e 250 nt, as sondas de 391 e 190 nt, as sondas de 328 e 226 nt e as sondas de 373 e 202 nt.